复方戒毒片对吗啡成瘾动物模型的影响
非法药物滥用是一个严重的社会和公共卫生问题，中医中药用于戒毒治疗具有悠久历史和独特优势，对于生理脱毒、消除稽延性戒断症状以及促进患者体能康复均具有显著效果。复方戒毒片具有清热解毒、平肝潜阳、活血通脉、安神定志的功效。在临床应用时发现该方对改善阿片类毒品患者戒断症状和抗复吸有显著疗效，本研究旨在通过动物实验进一步考察复方戒毒片的药效及作用机理，为进一步开发及临床推广应用奠定基础。
复方戒毒片(每片0.2g，广东省中医药工程技术研究院制剂室制备，批号Q1203018)；盐酸可乐定片；地西泮片。盐酸吗啡注射液；盐酸纳洛酮注射液；去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)、β-内啡肽(endorphin，β-EP)ELISA试剂盒。BS224S电子天平(1/万)；Bio-RAD680酶标仪；ZIL-2型小鼠自主活动箱。SPF级SD大鼠、NIH小鼠，雌雄各半。小鼠明暗箱装置由中国医学科学院药物研究所制小鼠避暗箱改进，实验装置由相连的明暗2个小室组成。CPP模型的建立分为预测试期(天然偏爱测试阶段)、条件性训练期、CPP测试期3个阶段。将达到实验条件的60只SPF级NIH小鼠随机分为6组，见表1。各组小鼠每天背部皮下注射盐酸吗啡9mg/kg，正常对照组注射生理盐水，共5天。将注射后的动物置于非偏爱侧白色箱体，40分钟/天。各给药组小鼠在每次注射前30分钟按剂量灌胃给药，正常对照组和模型对照组灌胃给予等体积蒸馏水。
见表1。与正常对照组比较，模型对照组小鼠白箱停留时间显著延长P＜0.01)；与模型对照组比较，复方戒毒片高、中、低剂量组小鼠白箱停留时间显著缩短(P＜0.01或P＜0.05)。将NIH小鼠60只随机分为6组，见表2。
按文献方法进行改良，第1-5天，按剂量递增法(25～150mg/kg)皮下注射建立吗啡依赖小鼠模型。各组小鼠于末次给吗啡后2小时，腹腔注射纳洛酮4mg/kg进行催促戒断。各给药组开始灌胃给药，连续3天。末次给药后1小时，检测各组小鼠在自主活动箱中的自主活动次数(5分钟)，在明暗箱中的穿箱次数(5分钟)以及小鼠在明区的时间。与正常对照组比较，模型对照组小鼠自主活动次数和穿箱次数明显增加(P＜0.01)，明区时间显著缩短(P＜001)；与模型对照组比较，复方戒毒片高、中、低剂量组小鼠自主活动次数、穿箱次数显著减少(P＜0.01，P＜0.05)，复方戒毒片高、中剂量组小鼠明区时间明显增加(P＜0.01)。取SPF级SD大鼠60只，随机分为2组，分别为正常对照组(10只)和吗啡依赖模型组(50只)，雌雄各半。模型组大鼠按剂量递增法复制，皮下注射盐酸吗啡，2次/天，剂量从每次5mg/kg起，逐次增加到每次80mg/kg，连续9天，注射量为0.2mL/100g。根据评分数值把模型组大鼠随机分组。连续>给药5天，在第5天给药2小时后给予腹腔注射纳洛酮4.0mg/kg催瘾，观察30分钟内大鼠的戒断反应，按改进的柳田知司评分标准进行评分，每只大鼠戒断症状分值为各项症状分值总和。
实验结束后处理动物，冰台上迅速分离额叶皮质脑组织，精确称质量，置入组织匀浆器中，加入0.1moL/L高氯酸溶液冰浴下制备10%匀浆液，高速冷冻离心机15000r/分钟4℃离心30分钟，取上清液置入1.5mL离心管，于－80℃备用。按试剂盒说明书进行测定。结果见表3，与正常对照组比较，给药前后模型对照组的戒断评分值显著增大(P＜0.01)；与模型对照组比较，各药物组给药前大鼠戒断评分值基本一致，差异无统计学意义(P＞0.05)；给药后，复方戒毒片高、中和低剂量组大鼠戒断评分值均明显降低(P＜0.01)。结果见表4，与正常对照组比较，模型对照组大鼠NE、5-HT含量显著升高(P＜0.01)，β-EP含量显著减少(P＜0.01)。与模型对照组比较，复方戒毒片高、中、低剂量组大鼠NE、5-HT含量明显降低(P＜0.01或P＜0.05)，β-EP含量显著增加(P＜0.01)。
本实验模拟人类吗啡依赖者采取的连续用药、逐步增量的方法制作小鼠和大鼠吗啡依赖模型，并采用纳洛酮催促戒断，结果发现小鼠的焦虑症状明显加剧，如自主活动次数和穿箱次数均明显增多，在明区的时间显著缩短(P＜0.01)；与对照组相比，大鼠震颤、咬牙等戒断症状明显，其总平均分明显增加(P＜0.01)，表明吗啡组动物已成瘾。给予复方戒毒片后，动物的戒断症状好转，焦虑行为和条件性位置偏爱症状减轻，提示复方戒毒片可以减轻吗啡成瘾动物的躯体依赖症状及改善脱毒后期的稽延性戒断症状。机体内存在内源性阿片样多肽，作用于阿片受体，通过多种信号传递系统协调NE 能系统、DA能系统、5-HT能系统、胆碱能系统及离子通道等多个系统的正常功能。当外源性阿片类物质进入体内与内源性阿片肽竞争阿片受体并与之结合，关闭Ca2+通道，开启K+通道，增加K+通透性，使蓝斑核(脑内最大的NE 能神经核)等神经核团发生抑制。因此，阿片类物质依赖时，内源性阿片样肽的含量和功能都比成瘾前低，当机体处于戒断状态时，阿片类物质对NE能系统神经元的抑制作用降低，蓝斑等部位突然活跃、放电增加，使得NE、DA、5-HT等释放增加，促使躯体戒断症状发生。由实验结果可以看出，动物处于纳洛酮催促戒断时，其大鼠额叶皮质内的NE、5-HT含量明显增加，β-EP的含量明显降低(P＜0.01)。而经过复方戒毒片治疗后，NE、5-HT含量下降，戒断症状减轻，而β-EP的含量明显上升(P＜0.01)。结果提示复方戒毒片减轻吗啡成瘾动物的依赖性和戒断症状可能通过影响NE能系统和5-HT能系统发>挥作用，以及通过增加β-EP含量和激活其功能有关。
本研究证实复方戒毒片在减轻动物吗啡依赖性和改善脱毒后期的稽延性戒断症状方面疗效肯定，今后将从脱毒后机体的调理及防复吸的干预作用等方面进一步研究。
文章转自广东药学院学报Jun.2014，30(3)